ELECTROFORESIS
Para la obtención y separación de fragmentos de ADN es necesario recabar muestras de ADN las cuales tendrán que ser lisadas en
buffer una vez obtenido es necesario separar el ADN con el resto de las biomoléculas como las proteínas la cual se realiza con
solventes orgánicos como el fenol o cloroformo.
Para la detección de un fragmento en específico es necesario que los fragmentos de ADN resultantes se
separen según su tamaño mediante electroforesis en geles de agarosa. Durante la
electroforesis, las moléculas de ADN, que poseen carga negativa, migran hacia
un electrodo positivo. Como resultado, se produce una separación continua de
los fragmentos de ADN de acuerdo a su tamaño, de modo que los fragmentos más
pequeños avanzan la mayor distancia con referencia al origen o punto de aplicación
de la muestra.
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO
IÓNICO
Es el método más utilizado para la separación de
ácidos nucleicos. El mecanismo básico es el intercambio reversible de los iones
en solución con los grupos funcionales unidos covalentemente a una fase
estacionaria insoluble llamada resina. Por ejemplo, un ácido nucleico con carga
negativa a pH 7,0 se unirá a un intercambiador iónico con grupos cargados
positivamente, pero efluirá de la columna al cambiar al pH del tampón (tampón
de elución) ya que los iones del tampón de elución interaccionan con los grupos
cargados del ácido nucleico o del intercambiador iónico, respectivamente;
primero efluirán de la columna las moléculas cargadas positivamente que no se
unen a la fase estacionaria y posteriormente, al añadir el tampón de elución,
efluirán las moléculas con poca carga negativa neta y luego las de mayor carga
negativa neta.
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