MEDIOS DE CULTIVO DEFINIDOS
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Son medios de cultivo que se caracterizan por su composición química es decirque se conoce exactamente la cantidad de cada uno de los compuestos que hay en el medio; se conocen tanto como (cualitativa y cuantitativamente) posteriormente se detallan algunos de los medios de cultivos.
1. MEDIO KNUDSON
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Macronutrientes
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(NH4)2SO4
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0.5 g/l
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MgSO4
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0.122 g/l
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Ca(NO3)2 4H2O
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0.694 g/l
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KH2PO4
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0.250 g/l
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Micronutrientes
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KI
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0.83 mg/l
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H3BO3
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0.056 mg/l
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MnSO4.H2O
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5.68 mg/l
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MoO3
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0.016 mg/l
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CuSO4.5H2O
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0.062 mg/l
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FeSO4.7H2O
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25.0 mg/l
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Para preparar el medio se pesa en una balanza analítica las cantidades de los compuestos señalados anteriormente y se disuelven en un litro de agua destilada, ajustar el pH a 5.5 luego se le agrega el agente gelificante (agar-agar o phytagel) y se calientan hasta que se hayan disuelto. Cuando el agente gelificante es agar se agrega la cantidad de 6,0 g/l y si se trata de phytagel se usa 2.0 g/l. Homogenizar el medio con agitación. Una vez preparado el medio se distribuye entre los recipientes que se van a utilizar, se tapan y se introducen a la autoclave para esterilizarlos a 121 °C por 20 minutos. El medio frío o solidificado puede guardarse en refrigeración hasta ser utilizado.
2. MEDIO MS (MURASHIGE Y SKOOG)
Es el medio más conocido y se elaboró tomando el cultivo in vitro de
tabaco como modelo. Es apto para la mayoría de las especies, por lo que es de
amplia utilización, excepto para las más sensibles a la salinidad ya que se
caracteriza por tener una elevada concentración salina.
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Macronutrientes
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NH4NO3
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1.65 g/l
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KNO3
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1.9 g/l
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MgSO4.7H2O
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0.37 g/l
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CaCl2.aq
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0.33 g/l
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KH2PO4
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0.17 g/l
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Micronutrientes
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KI
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0.83 mg/l
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H3BO3
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6.2 mg/l
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MnSO4.4H2O
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22.3 mg/l
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ZnSO4.7H20
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8.6 mg/l
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Na2MoO4.2H2O
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0.25 mg/l
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CuSO4.5H2O
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0.025 mg/l
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CoCl2.6H2O
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0.025 mg/l
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Na2.EDTA
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37.3 mg/l
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FeSO4.7H2O
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3.
MEDIO HELLER
Este medio es usado para semillas de Duraznero.
ZNSO4.
7H2O
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1
mg/L
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H3BO3
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1 mg/L
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MnSO4.
4H2O
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0.10 mg/L
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CuSO4.
5H2O
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1.03 mg/L
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Al Cl 3
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0.03 mg/L
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NiCl2.6H2O
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0.03
mg/L
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KI
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0.01 mg/L
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4. MEDIO J-19
Sales B5
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Cinetina
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1.0 mg/L
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ANA
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1.0 mg/L
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m-Inositol
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160 mg/L
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Sacarosa
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20 mg/L
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pH
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5.6
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5. MEDIO B5 (GAMBORG)
EL B5 fue formulado por Gamborg para cultivo in vitro
del callo de soja. Y este trabajó activamente en la elaboración de medios,
a los que dio diferentes números.
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Macro
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(NH4)2SO4
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0.134 g/l
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KNO3
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2.528 g/l
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MgSO4.7H2O
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0.246 g/l
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CaCl2.aq
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0.15 g/l
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KH2PO4
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0.15 g/l
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Micro
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KI
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0.75 mg/l
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H3BO3
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3.0 mg/l
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MnSO4.H2O
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10 mg/l
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ZnSO4.7H20
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2.0 mg/l
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Na2MoO4.2H2O
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0.25 mg/l
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CuSO4.5H2O
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0.025 mg/l
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CoCl2.6H2O
|
0.025 mg/l
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Na2.EDTA
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37.3 mg/l
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FeSO4.7H2O
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27.8 mg/l
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6. MEDIO WHITE
Es
un diluido complementario al medio MS y este fue elaborado para cultivo de
raíces de tomate.
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Macronutrientes
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Ca(NO3)24H2O
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0.3 g/l
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KNO3
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0.08 g/l
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MgSO4.7H2O
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0.72 g/l
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Na2SO4
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0.2 g/l
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NaH2PO4.H2O
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0.019g/l
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Micronutrientes
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KCl
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65 mg/l
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KI
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0.75 mg/l
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H3BO3
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1.3 mg/l
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MnSO4.7H2O
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7 mg/l
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ZnSO4.7H20
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3 mg/l
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Na2MoO4.2H2O
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0.25 mg/l
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CuSO4.5H2O
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0.025 mg/l
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CoCl2.6H2O
|
0.025 mg/l
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Na2.EDTA
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37.3 mg/l
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FeSO4.7H2O
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27.8 mg/l
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7. MEDIO J-19
8. MEDIO WPM (LLOYD Y MCCOWN)
Se elaboró para el
cultivo de tallos de plantas leñosas y arbustivas, tipos de plantas para las
que está especialmente adaptado.
9. MEDIO D2A
Medio VK-M
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1.0 mg/L
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ANA
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1.0 mg/L
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2,4-D
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0.2 mg/L
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ZEA
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0.5 mg/L
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10. MEDIO G-4
Sales B5
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2,4-D
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1.0 mg/L
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BAP
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0.5 mg/L
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AIA
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0.5 mg/L
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Sacarosa
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2.0 %
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MEDIOS DE CULTIVO INDEFINIDOS
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1. PREPARACIÓN DE AGAR CON EXTRACTO DE TRIGO, PAJA Y MALTA
Semillas de trigo 400 g
Extracto de malta 10 g
Paja de trigo 100 g
Agar-Agar 15 g
Dextrosa 10 g
Procedimiento:
Hervir el trigo en un litro de agua, dejando consumir el líquido hasta aproximadamente 500 ml, esto mismo se hace con la paja. Se filtran ambos extractos y se mezclan en un recipiente, se agrega los demás ingredientes y se le adiciona agua hasta ajustar un litro, esta suspensión se calienta hasta disolver todos los ingredientes.
2. MEDIO DE CULTIVO IN VITRO PARA ORQUÍDEAS
Se utilizan 3 tomates maduros cortados en trozos
1 (plátano) maduro cortado en trozos
900 ml agua
100 ml agua de coco
4 tabletas de tiamina 300 mg (vitamina B1)
Grenetina o gelatina sin sabor
3. PREPARACIÓN DEL AGAR CON EXTRACTO DE MALTA
Extracto de Malta 10 g
Agar-Agar 15 g
Procedimiento:
Se pesan los ingredientes y se mezclan en el matraz con 1000 ml de agua destilada. La suspensión se calienta y agita hasta que queden totalmente disueltos los ingredientes.
4. AGAR FRIJOL LIMA
Frijol lima molido 100 g
Agar-Agar 20 g
Agua destilada para completar 1000 ml
Procedimiento:
Se remojan los frijoles (Phaseoluslimensis)por 30 minutos. Se hierven por 30 minutos a baño maría con suficiente agua; se filtra el agua a través de una gasa; se coloca el líquido nuevamente en baño maría, se agrega el agar y se agita el líquido hasta que el agar se disuelva, se restaura el volumen del líquido hasta 1000ml con agua destilada.
5. AGAR JUGO V-8
Jugo V-8
Carbonato de calcio
Agar-Agar
Agua destilada
Bibliografía
1. http://cv.udl.cat/cursos/76304/t5/t5.htm
2. Antonie Van Leeuwenhoek. 35 (Suppl): pp. G27-8... Jun 1969.http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/5312005?ordinalpos=&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.SmartSearch&log$=citationsensor. Consultado el 15 de febreo de 2013.
