TAREA: MEDIOS DE CULTIVO DEFINIDOS E INDEFINIDOS

MEDIOS DE CULTIVO DEFINIDOS

Son medios de cultivo que se caracterizan por su composición química es decirque se conoce exactamente la cantidad de cada uno de los compuestos que hay en el medio; se conocen tanto como (cualitativa y cuantitativamente) posteriormente se detallan algunos de los medios de cultivos.

               

1.      MEDIO  KNUDSON 

Macronutrientes
(NH4)2SO4	0.5 g/l
MgSO4	0.122 g/l
Ca(NO3)2 4H2O	0.694 g/l
KH2PO4	0.250 g/l
Micronutrientes
KI	0.83 mg/l
H3BO3	0.056 mg/l
MnSO4.H2O	5.68 mg/l
MoO3	0.016 mg/l
CuSO4.5H2O	0.062 mg/l
FeSO4.7H2O	25.0 mg/l

Para preparar el medio se pesa en una balanza analítica las cantidades de los compuestos señalados anteriormente y se disuelven en un litro de agua destilada, ajustar el pH a 5.5 luego se le agrega el agente gelificante (agar-agar o phytagel) y se calientan hasta que se hayan disuelto. Cuando el agente gelificante es agar se agrega la cantidad de 6,0 g/l y si se trata de phytagel se usa 2.0 g/l. Homogenizar el medio con agitación. Una vez preparado el medio se distribuye entre los recipientes que se van a utilizar, se tapan y se introducen a la autoclave para esterilizarlos a 121 °C por 20 minutos. El medio frío o solidificado puede guardarse en refrigeración hasta ser utilizado.

2.    MEDIO MS (MURASHIGE Y SKOOG)

Es el medio más conocido y se elaboró tomando el cultivo in vitro de tabaco como modelo. Es apto para la mayoría de las especies, por lo que es de amplia utilización, excepto para las más sensibles a la salinidad ya que se caracteriza por tener una elevada concentración salina.

Macronutrientes
NH4NO3	1.65 g/l
KNO3	1.9 g/l
MgSO4.7H2O	0.37 g/l
CaCl2.aq	0.33 g/l
KH2PO4	0.17 g/l
Micronutrientes
KI	0.83 mg/l
H3BO3	6.2 mg/l
MnSO4.4H2O	22.3 mg/l
ZnSO4.7H20	8.6 mg/l
Na2MoO4.2H2O	0.25 mg/l
CuSO4.5H2O	0.025 mg/l
CoCl2.6H2O	0.025 mg/l
Na2.EDTA	37.3 mg/l
FeSO4.7H2O

3.   MEDIO HELLER

Este medio es usado para semillas  de Duraznero.

ZNSO4. 7H2O	1 mg/L
H3BO3	1 mg/L
MnSO4. 4H2O	0.10 mg/L
CuSO4. 5H2O	1.03  mg/L
Al Cl 3	0.03 mg/L
NiCl2.6H2O	0.03  mg/L
KI	0.01 mg/L

 4. MEDIO J-19

Sales B5
Cinetina	1.0 mg/L
ANA	1.0 mg/L
m-Inositol	160 mg/L
Sacarosa	20 mg/L
pH	5.6

5.    MEDIO B5 (GAMBORG)

EL B5 fue formulado por Gamborg para cultivo  in vitro del callo de soja. Y este trabajó activamente en la elaboración de medios, a los que dio diferentes números.

Macro
(NH4)2SO4	0.134 g/l
KNO3	2.528 g/l
MgSO4.7H2O	0.246 g/l
CaCl2.aq	0.15 g/l
KH2PO4	0.15 g/l
Micro
KI	0.75 mg/l
H3BO3	3.0 mg/l
MnSO4.H2O	10 mg/l
ZnSO4.7H20	2.0 mg/l
Na2MoO4.2H2O	0.25 mg/l
CuSO4.5H2O	0.025 mg/l
CoCl2.6H2O	0.025 mg/l
Na2.EDTA	37.3 mg/l
FeSO4.7H2O	27.8 mg/l

6.    MEDIO WHITE 

 Es un diluido complementario al medio MS y este fue elaborado para cultivo de raíces de tomate.

Macronutrientes
Ca(NO3)24H2O	0.3 g/l
KNO3	0.08 g/l
MgSO4.7H2O	0.72 g/l
Na2SO4	0.2 g/l
NaH2PO4.H2O	0.019g/l
Micronutrientes
KCl	65 mg/l
KI	0.75 mg/l
H3BO3	1.3 mg/l
MnSO4.7H2O	7 mg/l
ZnSO4.7H20	3 mg/l
Na2MoO4.2H2O	0.25 mg/l
CuSO4.5H2O	0.025 mg/l
CoCl2.6H2O	0.025 mg/l
Na2.EDTA	37.3 mg/l
FeSO4.7H2O	27.8 mg/l

7.    MEDIO J-19

Sales B5
Cinetina	1.0 mg/L
ANA	1.0 mg/L
m-Inositol	160 mg/L
Sacarosa	20 mg/L
pH	5.6

8.    MEDIO WPM (LLOYD Y MCCOWN)

Se elaboró para el cultivo de tallos de plantas leñosas y arbustivas, tipos de plantas para las que está especialmente adaptado.

9.    MEDIO D2A

Medio VK-M	1.0 mg/L
ANA	1.0 mg/L
2,4-D	0.2 mg/L
ZEA	0.5 mg/L

10. MEDIO G-4

Sales B5
2,4-D	1.0 mg/L
BAP	0.5 mg/L
AIA	0.5 mg/L
Sacarosa	2.0 %

MEDIOS DE CULTIVO INDEFINIDOS

1. PREPARACIÓN DE AGAR CON EXTRACTO DE TRIGO, PAJA Y MALTA

Semillas de trigo 400 g
Extracto de malta 10 g
Paja de trigo 100 g
Agar-Agar 15 g
Dextrosa 10 g

Procedimiento:

Hervir el trigo en un litro de agua, dejando consumir el líquido hasta aproximadamente 500 ml, esto mismo se hace con la paja. Se filtran ambos extractos y se mezclan en un recipiente, se agrega los demás ingredientes y se le adiciona agua hasta ajustar un litro, esta suspensión se calienta hasta disolver todos los ingredientes. 

2. MEDIO DE CULTIVO IN VITRO PARA ORQUÍDEAS

Se utilizan 3 tomates maduros cortados en trozos
1 (plátano) maduro cortado en trozos
900 ml agua
100 ml agua de coco
4 tabletas de tiamina 300 mg (vitamina B1)
Grenetina o gelatina sin sabor

3. PREPARACIÓN DEL AGAR CON EXTRACTO DE MALTA

Extracto de Malta 10 g
Agar-Agar 15 g

Procedimiento:

Se pesan los ingredientes y se mezclan en el matraz con 1000 ml de agua destilada. La suspensión se calienta y agita hasta que queden totalmente disueltos los ingredientes.

4. AGAR FRIJOL LIMA

Frijol lima molido 100 g
Agar-Agar 20 g
Agua destilada para completar 1000 ml

Procedimiento:

Se remojan los frijoles (Phaseoluslimensis)por 30 minutos. Se hierven por 30 minutos a baño maría con suficiente agua; se filtra el agua a través de una gasa; se coloca el líquido nuevamente en baño maría, se agrega el agar y se agita el líquido hasta que el agar se disuelva, se restaura el volumen del líquido hasta 1000ml con agua destilada. 

5. AGAR JUGO V-8

Jugo V-8
Carbonato de calcio
Agar-Agar
Agua destilada

Bibliografía

1. http://cv.udl.cat/cursos/76304/t5/t5.htm
2.  Antonie Van Leeuwenhoek. 35 (Suppl): pp. G27-8... Jun 1969.http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/5312005?ordinalpos=&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.SmartSearch&log$=citationsensor. Consultado el 15 de febreo de 2013.